Viral cytopathic effects

實驗目的

測定具感染力病毒的效價。

原理

具感染力的病毒可能會造成細胞的病變，利用連續稀釋法將病毒感染細胞，再以統計學計算細胞所產生的病變數，藉此可算出病毒的TCID50及PFU。

實驗材料

Baculovirus(AcMNPV)

Insect cell line (SF-9)

結果
 
1
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
+
+
                
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TCID50=0.1  (logTCID50=-1) (TCID50/ml=1000)

PFU/ml=690

討論

  • 由於這次實驗是最後一組做，前面有同學先將我們96 well的plate放置在我們的banch上方，要做之前我們反而去了incubator裡拿，不幸的就拿到了隔壁組標示在側面的同學的，由於以為是未加過病毒的細胞，所以我們又再加了一遍，對第二組同學真是不好意思。而之後助教在約三四天之後，又幫我們把那個未加過病毒的也加了進去，因此我們有了這個數據，由於病毒感染的時間可能還不夠長，因此我們看到的TCID50也是在十分高的濃度。
  • 由於不太容易分辨感染的情形，以1/4面積的細胞形態上變得不同來作為判定的標準。
  • PFU (PLAQUE FORMING UNIT)除了我們這一次所用的統計學的方法去算之外，也可以利用cell lawn infect with virus (series dilute)，選plaque數目約在30-300之間的該盤細胞，再算所形成的plaque數目，再乘以稀釋倍數，就可得pfu/ml。
  • Cytopathic effects of virus inection (CPE)通常可以運用在實驗時確定是否有感染，通常看inclusion bodies（內含體）的形成，內含體的形成是因為viral structure components的堆積，有分成intranuclear inclusions及intracytoplasmics inclusions。
  • ID50：infectious dose也就是說在這個劑量的時候可以使一半的細胞或個體感染，而LD50：lethal dose則是此劑量的病毒可以使一半數目的細胞或個體死亡。也就是說LD50值越高的病毒，它的毒力就較弱。