一.題目：
            菌液濃度的測量。
 

二.目的：
            利用Coulter counter測量菌液中所含的菌數以及細菌的平均體積，同時，學習如何測量OD值，利用上述兩種計算菌液濃度的方法，加上前幾週所學的plate counting的方法，比較三種的準確性及實用性。
 
 

三.結果：
            Coulter counter :
                         取菌液100λ到900λ的formaldehyde中作為固定之用，再以針頭過濾十次以將細胞打散，以免黏在一起測量出來的體積可能不準，取100λ到20ml的isotone中，再進行測量。

                        Cells number/ml=Nx(20ml/0.1ml)x(1000λ/100λ)=7.32x10⁷cells/ml

           Optical density：
                         取1ml不經稀釋及1ml經四倍稀釋的菌液至測量OD值的cells內，再進行測量。
 

四.討論：

• 利用PCA塗抹方法數菌落求濃度，較耗費時間且計數以及連續稀釋及污染的問題會使的所算的濃度較不準，通常PCA適用於看菌落的型態特徵以及是否有變異，此次實驗由於污染使的所長出的菌落型態根本不是我們原來的菌的菌落型態，污染可能來自於一開始養菌到PCB中就其他菌種的混入，或只是根本拿錯菌了，或者是當天作實驗時，塗plate時污染到其他組的菌，由於菌落大且菌落形狀似六角型黑邊，所以懷疑是第一組的菌株，由於我們自己原來的菌落是小的乳白色的菌落，在污染的plate上總共也只看到的兩顆，因此猜想可能是污染的菌長的較強勢將我們的菌的生長抑制過去，或者是塗上去的菌液中根本不含我們原本的菌液了。

• 利用測OD值和coulter counter所算出來的菌液濃度可以說是幾乎差不多，都在7x10⁷左右，只是四倍稀釋的OD值似乎不太準，可見pipetman的使用上不夠精準。這兩個方法都很適合用來測量菌液濃度，而OD值的測量只需要取出菌液直接去測量，利用散光程度，即可馬上知道菌液的濃度，故極適合用於一般實驗需要隨即知道菌液的濃度以判定所在的生長曲線的位置，一便決定加藥的時間，舉例來說，加IPTG去induce就需要菌液所處的OD值約是0.6-0.8，太濃或太稀都不適當，太濃的話表示生長曲線已快達靜止期，則加藥下去，由於細菌的代謝能力已經較低，受藥物的induction就較差。然而若細菌菌液的濃度太低就加藥下去對其生長可能造成負荷。利用coulter counter所測量的值，可以知道菌的體積，但若細菌沒有打散黏在一起，則測出的就是黏在一起的細菌的體積就不準確了，我們所測的菌的體積試和其他幾組比較，似乎滿大的，不過一般來說我們的菌落大小是屬於較小型的，雖說菌落大小和細菌體積大小不一定相關。