利用螢光物質受特定波長輻射激發產生螢光，以及免疫抗體與抗原結合的專一
性，我們可以針對某一細胞型態、發育、或是細胞內的組成進行螢光染色分
析。主要利用兩種方法將接有螢光的抗體(蛋白)標示在細胞上：一為
Direct immunostaining；一為Indirect immunostaining。


Direct immunostaining


細胞經過Fixation、Permeabilization、Blocking的處理後，將初級抗體(primary
antibody)加入後靜置。加入的初級抗體上直接接有一螢光物質，當抗體與其相對應
的抗原結合後，以緩衝液洗去未反應的抗體，即可在特定波長下顯色




圖為Microinject lucifer yellow 10分鐘，於200倍顯微鏡下的影像
Indirect immunostaining


細胞經過Fixation、Permeabilization、Blocking的處理後，將初級抗體(primary
antibody)加入後靜置，使抗體能與其相對應的抗原結合。以緩衝液洗去未反應的
抗體後，加入有螢光的二級抗體(secondary antibody)標示初級抗體，如此即可間接
以螢光標示我們想標示的物質。



圖為Rat cortical neurons，以 mouse anti-synaptophysin antibody為初級抗體，Texas red
conjugated anti-mouse IgG 為二級抗體，在400倍下所得到的影像
Direct immunostaining最主要的優點在於其非專一性的結合較Indirect immunostaining
來的小；而Indirect immunostaining的優點則在於它可放大螢光的強度使之更容易被觀察