在試管繁殖過程中,為了防止霉菌、細菌等污染,使試管苗
健康地生長,必須採用有效的方法,將所用培養器皿、培養基、
操作工具、培養材料、接種間進行滅菌。
通常,滅菌有物理方法和化學方法兩種。高壓蒸汽滅菌、烘
箱乾熱、紫外線照射為物理方法滅菌。稀釋、過渡、離心沉澱
和洗滌沖洗為物理方法去除微生物;新潔爾滅0.1%、酒精70%、
漂白粉或漂白精片3-7%、甲醛、次氯酸鈉溶液等消毒劑以及抗
菌等(氯卡青霉素和制霉菌素)的應用,都為化學方法滅菌或抑
菌。
[培養基及培養器皿的滅菌]
通常採用高壓蒸汽滅菌法滅菌,其過程如下:將培養基分裝到
培養器皿中,然後,進行包扎,放到高壓滅菌鍋中,關閉鍋蓋,
加熱。使鍋內壓力上升到0.5kg/cm2時,再次開啟放氣閥一次。
使冷空氣徹底砍掉,關閉放氣閥,使壓力穩定在1.1kg/cm2,
即溫度為121℃的條件下,維持15-20分鐘。到時移去熱源(煤氣爐
或電爐)。自然下壓後,再開啟放氣閥。取出,滅菌物放在乾淨處。
對於遇熱易分解的物質,如赤霉素等,可用細菌漏斗過濾法去
除細菌,然後,在無菌條件下,如到滅過菌的培養基中。也可採
用乙醚處理乾燥的熱不穩定物質半小時,然後,在無菌條件下,
30℃下除去乙醚,再用無菌水溶解物質,按需量加到滅過菌的培
養基中。也可採用乙醇、二甲亞楓滅菌,滅菌後,與滅菌劑一起
加入到培養基中。0.005%的乙醇,對於煙草癒傷組織的生長無毒
害。
玻璃器皿可採用烘箱乾熱滅菌法滅菌,放在150℃下40分鐘,
放在120℃下2小時。器皿放入烘箱以前必須乾燥,以免引起破
碎。溫度宜慢慢上升,滅菌後,待溫度逐漸下降到60℃以下,才
能打開箱門,以免因突然冷卻,致使器皿破碎。
[金屬用具]
(1)接種用的刀、鑷子、剪刀等,使用前需用酒精棉花擦拭乾淨
,然後在火焰上灼燒。冷卻後,在無菌條件下,將器具在
95% 酒精中浸一下,取出後放在酒精燈上燒一下,安放在玻
璃架上,待冷卻後使用。
(2)可將刀放在電熱杯的開水中煮沸5分鐘,然後,在無菌水中
冷卻後,待用。
(3)金屬用具用酒精棉花擦拭乾淨後,風乾。然後用紙或鋁盒,
包裝好,於高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌。冷卻後待用。這樣做需
準備上百把刀和鑷子。