實驗介紹：
　　　我是參加了老師旗下的一個細胞組，與yuki學長一組，主要是為了研究視網膜組織細胞是否可以在人造三維結構骨架正常生長，以資可以作為人工角膜的主題。而我被分配到負責的是此類細胞的一般基礎數據的建立和毒理承受度的檢測。而我起先是學習實驗室的器材認識和清洗滅菌，到最基本的細胞培養步驟，先從簡單的中國倉鼠卵巢細胞入手培養，到較難的人類纖維元細胞。不過到了角膜細胞之後，我並未參加。另外也全程跟著看學長做了免疫染色，用顯微鏡觀察了細胞因為毒藥而有程序性細胞凋零的現象。

實驗內容：
１． 最基礎實驗室器材認識　
以微量吸管 Pipetman P 的使用作為例子

A, 保持微量吸管垂直，將按鈕壓至第一段；B, 微量吸管頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C, 保持微量吸管垂直，將微量吸管頭與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一段；D, 壓至第二段把溶液完全釋放出；E, 釋放按鈕回原狀。

檢測微量吸管的準確度
儀器用具：
Pipetman P1000, P200, P20
天平
小燒杯及蒸餾水
方法步驟：
1) 將 P1000, P200, P20 之體積調整圈旋轉至最高值 (即 1000, 200, 20)。
2) 天平上預先放置秤藥紙或秤藥盤並歸零。以微量吸管吸取蒸餾水，加在秤藥紙或秤藥盤上秤其重量。每支微量吸管重複五次，並記錄每一次得到的結果。
3) 由結果判斷你的微量吸管是否該校正維修了？

２．細胞培養一般步驟，資列以Human fibroblasts作為例子
Cultures for Human fibroblasts (HF, doubling time = 24 h)
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A. DMEM 培養液

1. 5X DMEM medium 100 ml
2. 100X Glutamic acid 5 ml
3. 100X streptomycin / penicillium 5 ml
4. 5.5% NaOHCO3 10-20 ml
5. Hyclone fetal calf serum (FCS, 56C, 30min ) 50 ml
6. Hepes 緩衝液(1.5 M pH=7.4) 5 ml

7. 加 ddH2O 至 500ml

B : 分盤
1. 以一般之細胞分盤步驟
2. 每次約以1:3-1:6左右分細胞

C :更換 medium
如果細胞生長尚未達到分盤時。約每3-7天換一次 new medium
file 98proc/cell medium/hfculture

D. Regular culture for Human fibroblasts (Ref. other file)

３．Immuno stain
1.Plating of 10^5 human fibroblasts on a glass cover slip
2.PBS rinses
3.Fixation with 4% paraformaldehyde for 1h at 4℃
4.PBS washing(10min, 10min, 10min)
5.Permeating and blocking with 10% normal goat serum and 2% Triton X-100 in PBS for 1 h at 4℃
6.Washing with PBS containing 1% Triton X-100
7.Hybridization with primary antibody (1:500) in PBS for 2 h with agitation at 4℃
8.Washing with PBS containing 1% Triton X-100 (10min, 10min, 5min)
9.probing with Fluorescin-conjugated secondary antibody(1:1000) for 2 h with agitation in darkness at RT
10.Washing with PBS containing 1% Triton X-100 (10min, 10min, 5min)
11.Counterstaining with membrane (0.4mM NBD-ceramide and 0.5% Tween-20) and subsequently nucleotide stain (60μg/ml propidium iodide) for overnight and I h in darkness at RT, respectively.

實驗結果：
　　　其實是有一些基本數據，細胞的生長曲線和一些immuno stain的照片。但是因為實驗室電腦重灌和磁片遺失，已隨風而逝。所以我也放手讓去。

實驗室心得：
　　　很幸運地，因為我算是生科的領域裡算是不太認真的學生，也能趕搭流行，參與實驗室的實驗暑假實習部分，這先要感謝黃海美老師的不嫌和寬容。於是加入了實驗室這樣的大家庭，既是團體的生活，就是有分工細膩合作完成的特性。了解到team work的精要，溝通協調的重要及領導管理的必要。且實驗室的士氣也是實驗績效的一大因素，再者情緒化也是實驗成敗的一大殺手。
　　　很開心，在生命的低潮能加入一個家庭裡，許多學長姐陪我走過許多許多的風風雨雨。雖然我實驗技術不是學最多的，但獲得這些好學長，好朋友的交情一定是最多的。很滿足地，多認識這些人，在大學生活的暑假算是沒有留下空白的一頁。
現在也該是跟自己說，長假結束了，該是整理好自己，重新再出發的起點，或許危機就是轉機，該是規劃大學生涯最後半段和未來規畫的重要時刻了。正如我很努力地打完一場好球賽，於是我贏了網球場上的第一勝後，我告訴自己，我已經輸很久了，既然讓我贏了第一次，我想一直就這麼努力perform下去，一直贏下去．．．

　　　
寫在炙熱暑假藍天下陰影底的故事．．．．
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 白小白
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2002/1/13night