乳酸菌厭氧培養

1. 菌落外觀觀察： Pia1：圓形，乳白色，直徑約3mm，表面光滑，平坦高起狀。 Pia2：圓形，米色，直徑約0.7mm，表面光滑，凸起狀。 Pia3：圓形，中央為純白色而光滑，周圍較透明且凹凸，直徑約3.5mm，中央高起狀。 Pia4：略為圓形，米色較透明，直徑約3.5mm，表面較凹凸，中央高起而周圍也略為高起。 Pia5：圓形，米色，直徑約0.5mm，表面光滑，凸起狀。 Pia6：略為圓形；輻射狀，中央為純白，周圍較透明，直徑約為5mm，不過當菌落增加時(>300)，則會縮小至約2mm。 Pia7：略為圓形，乳白色，周圍較透明，直徑約4mm，表面凹凸，微微隆起狀。 觀察到的米色有可能部分為培養基的顏色，而菌落本身為透明的。

2. 顯微觀察記錄： Pia1：細長桿狀菌，另外還有一些較短甚至為小球狀的可能為雜菌，抑或可能為Pia1所產生的孢子。 Pia2：橢圓球狀菌，時可看見呈雙球甚至四球在一起的狀態，不過無法分辨是否為正在分裂狀態。 Pia3：細長桿狀菌，可能是因為很長所會略有扭曲的形狀。 Pia4：細長桿狀菌，大致上比Pia3短。 Pia5：橢圓球狀菌，外觀看來和Pia2相同，也時常形成雙球狀態。 Pia6：細長桿狀菌，時可看見數個菌相接在一起，可能為在分裂狀態。 Pia7：短桿狀菌，也有一些小球狀的，可能是剛分裂出來的或是孢子。

3. 菌落數記錄：見原始檔案

4. 心得討論： a. 在統一AB的樣本中，7/9的培養都沒有產生Pia3的菌落，而在7/13之後的培養都有發現，依照所謂的「統一AB」來看，應該是只有兩種乳酸菌，卻出現了第三種菌，很有可能是汙染，待之後購買新的樣本再確定結果。 b. 從菌落外觀及顯微鏡中來看，Pia2和Pia5可能是同一種菌，而這些在樣本中佔大多數，可能就是所謂的Bifidobacterium lactis，不過所知的乳酸菌多是桿狀的或是鏈狀的，而見到的Pia2及Pia5是單球狀或是雙球狀，故實際情況仍需用其他方法再做確定。 c. 在顯微鏡觀察中，可看見細菌除了整體的移動現象外，也能發現細菌本身有做些蠕動，不知是自身的動作還是受布朗運動影響，由於顯微鏡放大倍率不夠，故無法觀察是否具有纖毛等運動器官，不過因為發現這樣的動作是部份菌才有的，猜測是細菌自己的運動。 d. 在7/16的抽樣中，整體上來看菌落數有所減少，菌落也變小了，做了幾項假設：(a) 整體培養環境的變化。(b)培養的時間較短。(c)樣本本身就保存過久使得菌數減少且活性降低。然而如果操作上沒有錯誤的話，環境上的變化是應該可忽略的，而從培養的時間上來看都是大約為48小時，故培養的時間上可以視為相同的，所以比較有可能的是樣本保存太久，菌總數減少使菌落減少，活性降低使菌落較小。 e. 自7/9及7/13的培養成果中，選取適合分離的菌落，進行四區畫線塗菌，在7/18時觀察其結果。發現Pia1及Pia6沒有菌落產生。首先假設是畫線操作上的失誤，故在7/18時重新進行Pia1及Pia6的畫線培養，7/20時觀察其結果，發現仍然沒有菌落產生。再假設是培養時間不夠，便在7/20時將之前的Pia1及Pia6四區畫線再進行培養。另外有個假設是這些菌要有其他種類的菌生長來輔助，而這樣的假設在Pia6比較不可能，因為在此樣本內(光泉)只有發現Pia6，故猜想是其他的原因。 f. 從優沛蕾的瓶身上來看，它是有三種菌的，不過從培養的結果來看，只有發現兩種菌(Pia1及Pia2)，可能第三種菌不適合在此培養基上生長，也可能是三種菌之間的競爭使它無法生長。試著從樣本中直接分離或許能確定結果。 g. 7/20時觀察7/18的培養結果，發現優沛蕾的樣本在濃度較高時(10^-4)沒有Pia2菌落的產生，但是在濃度較低時(10^-5和10^-6)Pia2的菌落數比Pia1還多，故假設在高濃度時菌數太多，生長上會有抑制發生。 h. 承a.，7/20培養新開罐的統一AB優酪乳，發現仍然會有Pia3的菌落產生，但是不多，故仍然無法確定是否為汙染。另外作個假設，Pia3這個菌種原本在樣本裡存在的量不多，只有在開瓶之後才會逐漸成長，故在開瓶後馬上塗上的菌液是含有很少此菌的，這樣的假設是需要其他的實驗來証明的。 i. 承e.，7/20至7/23繼續培養之前的四區畫線，結果仍然沒有菌落產生。有可能需要更長的時間培養，不過不排除是在畫線時細菌已經死亡，而我們畫線上去的只是死菌而已，故無法長出菌落。