Method and Result

以下是實驗室中使用的VHL基因的來源

我在實驗室的工作有二個,一個是將果蠅中一個類以人類hif-1a 的基因（sima)clone 出來，因為sima它本身具有一個odddepen(oxygen dependent degradation)domain。這個步驟的目是為了製造抗體，以用來偵測hif-1a在氧濃度低時穩定的原因。我在一開始使用pet15b這個plasmid，但是沒有很明顯的效果，據推測應是fuse protein和原先的大小差不是很多的關係（bamH1,Ecor1)，

所以在八月多時改變方法，以pGEX這個plasmid 來進行clon的工作，而結果想當地令人滿意，因為pGEX有一個相當大的GST的部份，可以在IPTG induce下看出明顯的結果。左邊的是pGEX.右邊的是pGEX-Sima-odd,

在IPTG　induce下的結果 ,可以看到其中有二個特別明顯的sima-GST的protein產生（右３＆５）

我的第二個工作是進行Yeast Two Hybrid 的工作，希望藉此找出VHL除了和hif-1a之外，是否還和其他protein作結合，而YTH則是一個很好的方法。我們以使用VHL和果蠅的library基因作研究，培養yeast 並選擇適當的colony（如下圖，排選右邊有長，但左邊沒有的）

用IPTG　induce 找出Ｇal有被製告的colony(代表有interaction),之後將細胞打碎，用antibody去偵測VHL,看有多少不同的protein會和VHL,以下是其結果,可以看到還是有少部分的protein會和VHL做結合,而呈現不同的圖案,之後就是將這些protien分離後sequence出來,就可以知道它會和哪一類protein結合,以及符不符合我們的假設了。